致敏試驗(yàn)

時(shí)間: 2022/10/18

致敏試驗(yàn)

已致敏的機(jī)體再次接觸相同抗原或半抗原時(shí)所發(fā)生的組織損傷或生理功能紊亂

具有致敏作用的化學(xué)物經(jīng)一定途徑進(jìn)入機(jī)體，與組織蛋白結(jié)合形成完全抗原，刺激免疫活性細(xì)胞產(chǎn)生致敏淋巴細(xì)胞或體液抗體；經(jīng)1~2周致敏期，使體內(nèi)免疫反應(yīng)得到充分發(fā)展，形成一定數(shù)量的致敏淋巴細(xì)胞或特異抗體。當(dāng)再次接觸（激發(fā)）時(shí)使機(jī)體對該化學(xué)物產(chǎn)生感受性增高的狀態(tài)，以一定的異常形式表現(xiàn)

致敏試驗(yàn)與刺激試驗(yàn)的區(qū)別

刺激試驗(yàn)是一個(gè)局部的炎癥反應(yīng)，而致敏是全身免疫系統(tǒng)的反應(yīng)，屬于細(xì)胞免疫應(yīng)答

應(yīng)用范圍舉例：

常用測試方法

Common test methods

豚鼠最大劑量法（GPMT）

封閉式貼敷法（Buehler 試驗(yàn)）

3	局部淋巴結(jié)試驗(yàn)法（LLNA）

其中豚鼠最大劑量法（GPMT）和封閉式貼敷法（Buehler試驗(yàn)）是最常用的、生物安全性評價(jià)中使用率最高的兩種方法。

豚鼠最大劑量試驗(yàn)是最敏感的方法，歐洲國家使用此方法較廣泛；

封閉式貼敷試驗(yàn)適用于局部產(chǎn)品，美國常用此方法。

局部淋巴結(jié)試驗(yàn)（LLNA）被經(jīng)濟(jì)與合作發(fā)展組織接受作為當(dāng)前豚鼠試驗(yàn)的唯一替代方法，該法對動物保護(hù)方面也有所改善，也被認(rèn)可用于化學(xué)物致敏活性的檢測。

測試標(biāo)準(zhǔn)

testing standard

常見測試標(biāo)準(zhǔn)：

1	醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第10部分：刺激與遲發(fā)型超敏反應(yīng)試驗(yàn) ISO 10993-10:2010
2	醫(yī)療器械生物學(xué)評價(jià) 第10部分:刺激與皮膚致敏試驗(yàn) GB/T 16886.10-2017

測試步驟

Test Step

致敏試驗(yàn)-豚鼠最大劑量法（GPMT）

試驗(yàn)原理：單一化學(xué)物采用豚鼠最大劑量試驗(yàn)，對材料在試驗(yàn)條件下使豚鼠產(chǎn)生皮膚致敏反應(yīng)的潛能做出評定。

準(zhǔn)備動物

30只豚鼠，雌雄不限，300g~500g。

預(yù)試驗(yàn)

預(yù)試驗(yàn)?zāi)康模簽榱舜_定主試驗(yàn)中所用試驗(yàn)樣品的濃度。
確定主試驗(yàn)中所用實(shí)驗(yàn)樣品的濃度
為主試驗(yàn)的局部誘導(dǎo)階段所選擇的最高濃度應(yīng)僅導(dǎo)致輕度紅斑，不產(chǎn)生其他有害作用
為主試驗(yàn)的激發(fā)階段選擇的最高濃度應(yīng)不使動物產(chǎn)生紅斑

主試驗(yàn)

3.1 動物分組

每種試驗(yàn)樣品應(yīng)至少使用10只動物，對照組至少使用5只動物。

10只試驗(yàn)動物和5只對照動物如全部呈陰性反應(yīng)，則再進(jìn)行試驗(yàn)也未必會出現(xiàn)陽性反應(yīng)。

但是，如出現(xiàn)任何疑似反應(yīng)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行再激發(fā)，如仍有疑似反應(yīng)，則要重新進(jìn)行試驗(yàn)，最少采用20只試驗(yàn)動物和10只對照動物。

3.2 皮內(nèi)誘導(dǎo)階段->局部誘導(dǎo)階段->激發(fā)階段

按下圖所示（A、B和C），在每只動物去毛的肩胛骨內(nèi)側(cè)部位成對皮內(nèi)注射0.1mL